Neogen Petrifilm™ 李斯特菌快檢片（原廠牌3M）

      Neogen Petrifilm 環境李斯特菌快檢片為即開即用的培養基系列產品，含有選擇性培養基、營養素、冷水溶凝膠以及呈色指示劑，有助於李斯特菌菌落之計數。Neogen Petrifilm 環境李斯特菌快檢片適用於環境檢體之檢測。
<       若呈色指示劑顯示出李斯特菌屬的存在，如 : Listeria innocua，表示其環境條件亦適合單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）生長，3M Petrifilm 環境李斯特菌快檢片可檢測大部分的環境李斯特菌，包括：L. monocytogenes、L. innocua、L. welshimeri、L. ivanovii。此外，L. grayi/murrayi 與 L. seeligeri 會在 Neogen Petrifilm 環境李斯特菌快檢片生長，但不會形成典型菌落。
       環境中許多微生物可能受到清潔劑或殺菌劑影響而損傷，使用 Neogen Petrifilm 環境李斯特菌快檢片前，檢體應先以蛋白緩衝液 (Buffered peptone water, BPW) 混合靜置一小時，可使受到壓力損傷的李斯特菌恢復，此過程為細胞修復而非增殖步驟。
          • 細胞修復：20°C ～ 30°C，1 ~ 1.5 小時。
          • 菌落培養：35°C ± 1°C 或 37°C ± 1°C，28 ± 2 小時。

簡單的操作步驟：

    儲藏

建議將未開封 Petrifilm 大腸桿菌群快檢片儲存在 -20至 8°C的冷凍或冷藏溫度。請在包裝上的到期日期之前使用完畢。使用前，請讓產品恢復到室溫。

已開封的包裝若要密封，請將袋口反折並貼上膠帶，放入夾鏈袋中置於冷藏或直接儲藏於防潮箱中。

    樣品備製

使用無菌塗抹棒或無菌採樣海綿收集環境檢體，棒頭與海綿須先沾濕，潤濕液建議為無菌水、蛋白腖緩衝液(BPW)或中性緩衝溶液(Letheen Broth或NeutralizingBroth)

在無菌條件下加入2mL(塗抹棒)或5mL(採樣海綿)之無菌蛋白腖緩衝液(20°C~30°C)。不要使用增殖液。

使用鐵胃機、擠壓或震盪混合等方式，讓環境檢體與蛋白腖緩衝液充分混合一分鐘。樣品於室溫下(20°C–30°C)靜置1小時，最多不超過1.5小時，再次充分混合均勻。此步驟目的為修復受損的李斯特菌，此為必要步驟，最佳菌落生長或修復之pH值為4~9。

    接種

將Neogen Petrilm 環境李斯特菌快檢片置於平坦處，掀起上層膜。

使用微量吸管吸取3mL樣品，垂直滴於底膜中央處。

輕輕地將上層膜向下捲動覆蓋底膜。

將Neogen Petrilm 方形壓板置於快檢片中央處，輕輕地按壓壓板，使液體均勻的分佈在圓形培養區域，切勿轉動或滑動壓板。

    培養

於35±1℃或37±1℃下培養28±2小時。培養時，透明面朝上，水平放置，堆疊勿超過10片。不要超過培養時間30小時，以免影響結果判讀。

Neogen Petrilm 環境李斯特菌快檢片可搭配標準菌落計數器使用。因泡棉不含選別性培養基，因此不要計算圓形培養區域外的菌落。

定量採樣與判讀：

以採樣海綿為例：

添加指示劑有助菌落計數與判讀：