大腸桿菌 O157( 含 H7)檢驗套組
大腸桿菌 O157( 含 H7) 的檢測對於食品安全而言是非常重要的,大腸桿菌O157:H7 曾經引發嚴重的疾病及大規模的傳染,常見汙染食物包括生乳、由生乳製作的軟起司、未殺菌的果汁、生菜、生牛肉及未煮熟之牛肉等。
樣品增殖
增殖稀釋比例為 1:10,增殖時間為 8~24。
1. 增殖液為 Neogen™ BPW ISO
2. 將樣品與增殖液充分混合均勻 2 分鐘,若檢體為肉類或具大顆粒的樣品,建議使用濾袋,增殖時置於41.5 ±1℃下培養。
一般增殖條件
樣品基質 | 樣品量(g) | 增殖液體積(ml) | 增殖溫度(±1℃) | 增值時間(hr) |
一般食品 | 25 | 225 | 41.5 | 18~24 |
生肉 | 25 | 225 | 41.5 | 8~18 |
生肉 | 25 | 975 | 41.5 | 10~18 |
Neogen 病原菌檢測套組
Neogen 利用恆溫去氧核糖核酸擴增技術和生物性冷光偵測技術能克服傳統檢測限制,即
便在複雜的基質樣品中,仍可偵測到最低1~5 CFU 的目標病原菌。此外,採用了即用型試
劑,不僅降低誤差,且有顏色變化設計,便於實驗操作控管,增加您對檢測過程的信心。
進化科技 簡化流程
病原菌分子檢測設計原理
Neogen™ 分子檢測系統是利用多重引子來辨認基因中的獨特區域和Bst DNA 聚合酶提供連續性快速的擴增放大反應。加上焦磷酸(PPi) 是DNA 擴增放大反應的副產物,與腺苷醯硫酸(APS) 經由ATP- 硫酸化酶(ATP-Sulfurylase) 催化,轉化成三磷酸腺苷酸(ATP),再由ATP 和螢光素酶產生反應生成可被偵測的生物性發光,因而判定目標病原菌DNA 的存在。由於此擴增放大和偵測是同時且持續的,所以能提供即時的結果並縮短檢測所需的時間。
恆溫去氧核糖核酸擴增技術
- 6 個高專一性引子辨認基因中不同區域
- Bst DNA 聚合酶於恆溫下作用
- 有效、快速且持續地擴增放大
生物性冷光偵測技術
- DNA 擴增產生副產物焦磷酸(PPi)
- 焦磷酸轉化成高能量化合物—三磷酸腺苷酸(Adenosine Triphosphate, ATP)
- 螢光素酶利用 ATP 產生生物性發光
利用6 個高專一性的引子與Bst DNA 聚合酶進行連續及快速的LAMP 放大過程 (Loop-mediated isothermal amplification)。
DNA 擴增後大量生成副產物焦磷酸(PPi),與APS 在ATP- 硫酸化酶作用下,焦磷酸轉化成ATP。
螢光素酶利用ATP 生成可被偵測的生物性冷光,因而判
定目標病原菌DNA 的存在。由於此擴增放大和偵測是同時且持續的,可即時反應檢測過
程,最快15 分鐘即可得知陽性結果。
檢測套組
檢體製備流程
- 打開溶菌小管,取20μL 增殖過後的檢體加入溶菌小管。注意: 溶菌小管蓋子不須蓋回。溶菌小管常溫時呈現粉紅色。
- 將溶菌小管置於加熱塊上面,於100℃(±1℃) 加熱15 分鐘。備註: 等待加熱的時間,建議可利用空檔於軟體設定檢測項目。
- 將溶菌小管置於冷卻塊於室溫(20~25℃) 冷卻5 分鐘。注意: 如須中斷檢測,建議於此步驟,將溶菌小管蓋子蓋回並存放冷藏4~8℃,檢體可保存3 天。
- 從溶菌小管取出20μL 上清液加入試劑小管。連續吸放五~ 六次達到均勻混和。注意: 勿吸取溶菌小管底層溶液,避免實驗干擾。
- 將試劑小管按照軟體設定位置,放入裝填托盤中。
- 於軟體介面啟動檢測,待儀器上蓋開啟,將裝填托盤放入儀器內,蓋起上蓋,檢測即自動進行。
- 陽性結果最快15 分鐘便能得知;陰性結果約需60-75 分鐘。備註: 陰性反應時間: 李斯特菌屬及單增李斯特菌需75分鐘,其餘皆60 分鐘。
儀器操作流程
Neogen™ 分子檢測系統操作流程
- 開啟軟體和儀器。
- 以軟體設定檢測項目。
- 準備檢體並將其依設定放入裝填托盤( 參照檢體製備流程)。
- 啟動反應,儀器上蓋自動開啟。
- 將裝填托盤放入儀器中並關閉上蓋,檢測便自動進行。
- 觀看結果與報告。
▲ 功能卓越的軟體操作
- 可同時運行四台分子檢測儀。
- LED 光條可即時顯示儀器狀態,讓您一眼辨識。
- 軟體介面的檢測項目圖示搭配試劑套組皆採顏色管理。
- 分析結果即時顯示。
- 實驗結果會自動儲存,忘記存檔也不怕。
- 過往檢測結果隨手可得。
- 多種報告格式,一鍵輸出好簡單。
- 系統設有密碼,便於實驗室人員管理。